طرق التعقيم في مختبرات زراعة الأنسجة النباتية
يعد التعقيم في المختبرات من أهم الخطوات قبل البدء في العمل، وخصوصا لنجاح التجربة، وتجرى عمليات زراعة الأنسجة داخل المختبرات والمعامل المعقمة وذلك لإتمام عملية زراعة الأنسجة النباتية بنجاح، فالتلوث أثناء زراعة الأنسجة يجعل الأنسجة المزروعة غير صالحة، حيث يمكن العثور على مسببات الثلوث الموجودة في أماكن مختلفة على الأكواب أو الماصات أو على أوعية الاستزراع الخاصة، وهنالك العديد من الأساليب والطرق المختلفة للتعقيم ومنها:[١]
التعقيم بالحرارة (بالإنجليزية: Sterilization by heat)
للتعقيم بالحرارة نوعان اثنان، هما:[١]
- التعقيم الحراري الرطب: هو التعقيم الذي يعمل بوجود البخار الساخن عالي الضغط، وذلك لتعقيم الجسم وباستخدام هذه الطريقة يتم تعقيم أدوات المختبر، والمواد الزجاجية، والماصات، والوسائط المزروعة بمساعدة جهاز الأوتوكلاف، حيث يتم التخلص من جميع الميكروبات تقريبا.
- التعقيم الحراري الجاف: عند تعقيم الأدوات المعدنية من خلال التعقيم الرطب قد تتعرض بعضها لحدوث الصدأ، لذلك يتم استخدام التعقيم من خلال الحرارة الجافة للأدوات المعدنية؛ مثل الحاملات، والملقط، وذلك من خلال استخدام أدوات مثل معقمات الخرز الزجاجي وموقد البنزن.
التعقيم بالترشيح (بالإنجليزية: Sterilization by filtration)
بسبب تعرض بعض المكونات الوسائط لدرجات حرارة عالية أثناء التعقيم، وهذا يؤدي إلى تحللها، مثل المستخلصات النباتية والهرمونات، فيتم استخدام طريقة الترشيح من خلال (حقنة / إبرة) وغشاء مرشح، ويمكن إضافة هذه المكونات الحرارية إلى مجموعة الوسائط في مُحضِّر الوسائط، من خلال حقنها عبر وصلة الحاجز الموجود على الغطاء، يمكنك دفع محلول سائل من خلال غشاء للتعقيم، بحيث يحدد غشاء التعقيم حجم المسام في المرشح وحجم الكائنات الحية الدقيقة التي سيتم تصفيتها، وخلال عملية التعقيم، يتم إزالة جميع الجسيمات والكائنات الدقيقة التي يزيد حجمها عن قطر مسام الفلتر.[٢][١]
تعقيم الهواء (بالإنجليزية: Air sterilization)
تستخدم عملية تعقيم الهواء لوجود العديد من الميكروبات في الهواء المحيط، والتي ستستقر في النهاية على أسطح الأدوات، لذلك يتم تعقيم الهواء من خلال معدات معالجة للهواء، مثل خزانات التدفق الرقائقي، حيث يمر الهواء عبر الفلتر وبالتالي يحبس الفطريات والبكتيريا وجزيئات الغبار الأخرى.[٢]
التعقيم المجزأ أو التندلة (Tyndallization)
هذه الطريقة يتم استعمالها لقتل الأبواغ المقاومة للحرارة، من خلال تسخين الوسط في حمام مائي لمدة ساعة واحدة لمدة 3 أيام متتالية، ومن ثم يتم الاحتفاظ به في درجة حرارة الغرفة بعد أن يغلي مرتين متتاليتين.[٢]
تعقيم السطح (Surface sterilization)
تستخدم هذه التقنية لتعقيم سطح النبات المستأصل الذي يستخدم في عمليات زراعة الأنسجة.[٢]
تعزيز إجراءات التعقيم
يتم تعزيز عملية التعقيم من خلال الإجراءات التالية:[٣]
- وضع المادة في محلول كحول إيثيلي 70% قبل التعقيم، حيث يزيد من فعالية التعقيم.
- يعمل إضافة عامل ترطيب، مثل TWEEN® 20 أو 80 (المنتج رقم P1379 أو P1754، على التوالي) إلى مواد التعقيم على التقليل من التوتر السطحي.
- يعد إجراء عملية التعقيم تحت التفريغ أفضل، حيث يعمل على التخلص من فقاعات الهواء وذلك يوفر تعقيمًا أكثر كفاءة.
المراجع
- ^ أ ب ت "4 methods of sterilization used in plant tissue culture", abassociates.
- ^ أ ب ت ث " The Five Ideal Explant Sterilizing Methods in Tissue Culture", plant cell.
- ↑ "Explant Sterilization – Plant Tissue Culture Protocol", MERCK.
